牛奶體細(xì)胞數(shù)有哪些檢測方法？

牛奶體細(xì)胞數(shù)量是衡量奶牛生理健康狀況的重要指標(biāo),高體細(xì)胞數(shù)直接指證奶牛的乳腺患有炎癥性疾病?；佳装Y奶牛所產(chǎn)的牛乳不僅營養(yǎng)成分含量偏低,而且人們誤飲后甚至?xí)l(fā)群體性食物中毒,直接威脅飲用者的安全和健康。對牛乳體細(xì)胞數(shù)進(jìn)行檢測,可以及時發(fā)現(xiàn)有炎癥的奶牛,進(jìn)而從源頭上保障牛乳的品質(zhì)。介紹了關(guān)于牛乳體細(xì)胞數(shù)的主要檢測方法,并對這些方法的特點進(jìn)行了分類匯總,進(jìn)而對這些方法的發(fā)展和應(yīng)用進(jìn)行了總結(jié)和展望。牛奶體細(xì)胞數(shù)有哪些檢測方法？下面具體來介紹一下：

1、牛奶體細(xì)胞的來源及正常指標(biāo)

奶牛乳腺正常時，分泌鮮乳內(nèi)的體細(xì)胞主要為巨噬細(xì)胞，但當(dāng)乳腺發(fā)生炎癥時，分泌鮮乳內(nèi)的體細(xì)胞主要為白細(xì)胞，是一種免疫細(xì)胞，是由于機(jī)體與病原相互斗爭產(chǎn)生的物質(zhì)。當(dāng)奶牛乳腺組織發(fā)生感染后，90%以上都為嗜中性粒細(xì)胞。在細(xì)菌侵入到乳腺組織并開始大量繁殖時，就會導(dǎo)致多核白細(xì)胞等免疫細(xì)胞逐漸接近感染部位，并侵入乳腺泡將病原微生物吞噬。另外，發(fā)生炎癥反應(yīng)時，巨噬細(xì)胞會大量增殖，并產(chǎn)生一些化學(xué)介質(zhì)，促使炎癥反應(yīng)進(jìn)一步加重，造成組織毛細(xì)血管的通透性明顯增強，促使血漿白蛋白、免疫球蛋白以及其他多種白細(xì)胞侵入乳腺泡腔內(nèi)，形成白細(xì)胞用于吞噬細(xì)菌。

牛奶體細(xì)胞數(shù)(SCC)主要用于判斷奶牛乳腺健康與否。例如，當(dāng)牛乳中SCC有所增加，但乳房組織沒有出現(xiàn)明顯癥狀，即可判斷患有亞臨床型乳房炎。另外，牛乳中的SCC還能夠用來表明發(fā)生炎癥反應(yīng)的輕重程度。通常來說，奶牛沒有發(fā)生乳房炎分娩的乳汁中，每毫升的牛乳SCC在20萬個以下，而如果發(fā)生臨床型乳房炎或者亞臨床型乳房炎時，每毫升牛乳SCC可超過50萬個。

2、常用檢測方法

1）顯微鏡細(xì)胞計數(shù)法。人工顯微鏡計數(shù)法是一種直接檢測法，是指鮮牛乳樣品直接滴加在載玻片上使用顯微鏡觀察，并由人工計算所含的體細(xì)胞。鮮牛乳采取該法檢測體細(xì)胞的步驟是：先配置染色液，即取40　mL四氯乙烷和54　mL乙醇，充分搖晃均勻，然后放在65℃的溫水溶液中進(jìn)行3　min加熱，再添加0.6　g甲基蘭，混合均勻后置于4℃冰箱，在溫度達(dá)到4℃時再添加6　mL冰醋酸，放在常溫條件下保存；取一片干凈的載玻片，劃分成4個小方格，每格面積為1　cm2，然后用微量注射器吸取10　μL生鮮牛乳樣品注射到1　cm2的載玻片上，平放在恒溫箱中，干燥后浸在染色液，后形成均勻玻片；放在300～500倍顯微鏡下對玻片上的染色細(xì)胞進(jìn)行觀察，按照一定的準(zhǔn)則計算體細(xì)胞數(shù)量。一般按照“數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右”的計數(shù)規(guī)則進(jìn)行計數(shù)，防止出現(xiàn)遺漏和重復(fù)。盡管該法使用設(shè)備簡單，容易在實驗室外操作，但整個操作過于繁瑣，具有較大的工作量，特別是在計數(shù)時容易出錯。在人工顯微鏡計數(shù)法的基礎(chǔ)上，通過改進(jìn)發(fā)明熒光顯微鏡計數(shù)法，即使用特殊的緩沖液或染液對鮮牛乳樣品進(jìn)行處理，再使用安裝相應(yīng)濾色鏡的熒光顯微鏡進(jìn)行計數(shù)。一般來說，鮮牛乳中的蛋白質(zhì)不會形成熒光，不會影響測定，脂肪球會形成黃綠色的熒光，使用相應(yīng)的濾色鏡能夠擋住，只有體細(xì)胞形成的紅色熒光能夠看見，從而能夠更好地使熒光細(xì)胞同周圍背景進(jìn)行區(qū)別，能夠有效提高計數(shù)的準(zhǔn)確率。

2）加利福尼亞細(xì)胞數(shù)測定法（CMT法），是一種間接檢測法，其原理是鮮牛乳中的體細(xì)胞接觸表面活性試劑，如溴甲酚紅紫、烷基芒硫酸鹽、烷基芳基磺酸或者氫氧化鈉等，能夠使細(xì)胞收縮凝固，同時釋放脫氧核糖核酸，并發(fā)生凝聚，含有越多的體細(xì)胞，凝聚狀態(tài)則會越強，形成越多的凝聚塊，對這些凝聚塊統(tǒng)計就能夠估算體細(xì)胞的數(shù)量。該法所需設(shè)備少，操作簡單，檢測速度快，靈敏度高，價格便宜，結(jié)果比較準(zhǔn)確，且同直接鏡檢細(xì)胞計數(shù)法、過氧化氫酶活性等也具有較好的關(guān)聯(lián)性，且受環(huán)境溫度影響較小，樣品中即使混雜有毛發(fā)等外源物質(zhì)也不會對結(jié)果產(chǎn)生影響，適合對個體奶牛或者總奶樣進(jìn)行檢驗；缺點是只能夠得到體細(xì)胞的相對數(shù)量，比較容易受到人為因素影響，必須經(jīng)過專門培訓(xùn)的人員才能夠進(jìn)行該項檢查。另外，該法有時會出現(xiàn)假陽性結(jié)果，如鮮牛乳不新鮮或者泌乳末期的乳汁等，建議是檢測泌乳量中期的牛乳。牛乳感染細(xì)菌后能夠產(chǎn)生的毒素，導(dǎo)致體細(xì)胞被破壞，會使臨床乳腺炎陽性的牛乳呈陰性。

3）pH值檢測法。該法是一種間接檢測法，由于奶牛乳房發(fā)炎后所分泌的乳汁pH值同體細(xì)胞間存在一定的關(guān)聯(lián)性，從而可經(jīng)由測定牛乳樣品的pH值來判斷所含體細(xì)胞的數(shù)量。檢測時，先用一次性培養(yǎng)皿取2　mL左右的鮮牛乳樣品，并滴加相同劑量的診斷液，按照同心圓方式對培養(yǎng)皿進(jìn)行搖動，在30～60　s之間就能夠判斷結(jié)果。當(dāng)測地的牛乳pH值處于6.　4～6.6之間，判斷每毫升的牛乳中含有0～20萬個體細(xì)胞；pH值處于6.6～6.8之間，判斷每毫升含有20萬～50萬個體細(xì)胞；pH值位于6.8～7.0之間，判斷每毫升含有50萬～150萬個體細(xì)胞；pH值位于7．O～7.2之間，判斷每毫升含有150萬～500萬個體細(xì)胞；pH值超過7.2，判斷每毫升含有500萬個以上的體細(xì)胞。該法操作簡單，但是檢測結(jié)果有時不太準(zhǔn)確，還需要配合進(jìn)行顯微鏡檢測才能獲得比較準(zhǔn)確的結(jié)論。

檢測牛奶體細(xì)胞數(shù)有哪些方法？
前獲得世界各國普遍承認(rèn)和使用的體細(xì)胞計數(shù)方法概括起來主要分為顯微鏡人工計數(shù)法和自動計數(shù)儀計數(shù)法。
1、顯微人工計數(shù)：體細(xì)胞計數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)方法為顯微鏡鏡檢法，此法準(zhǔn)確，大部分的快速檢測方法均用此法作校準(zhǔn)，但在制備樣品、計數(shù)鏡檢時費時、費力，不適合作為現(xiàn)場快速和大樣品量時使用。

2、自動計數(shù)儀計數(shù)：目前，在乳品生產(chǎn)中牛乳體細(xì)胞計數(shù)主要是依靠大型的體細(xì)胞儀完成的，體細(xì)胞自動計數(shù)分析研究主要有以下兩個方面:
（1）流式細(xì)胞分析法.具代表性的產(chǎn)品為美國BentlySomaCount計數(shù)儀。基于激光流式血細(xì)胞計數(shù)的方法來測定原奶中的體細(xì)胞數(shù)量,該法檢測速度快，適合乳品集中檢測，操作簡便計數(shù)準(zhǔn)確，耗材成本低。
（2）另一方面是利用數(shù)字圖像分析系統(tǒng)，該方法是基于標(biāo)準(zhǔn)鏡檢法的一種方法，華誠睿光的牛博士Ⅱ和牛博士Ⅲ就是這種檢測方法的典型代表。機(jī)器設(shè)備成本低但是耗材成本高。