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牛奶體細(xì)胞數(shù)有哪些檢測方法?

更新時間:2018-07-18點擊次數(shù):8482

牛奶體細(xì)胞數(shù)量是衡量奶牛生理健康狀況的重要指標(biāo),高體細(xì)胞數(shù)直接指證奶牛的乳腺患有炎癥性疾病?;佳装Y奶牛所產(chǎn)的牛乳不僅營養(yǎng)成分含量偏低,而且人們誤飲后甚至?xí)l(fā)群體性食物中毒,直接威脅飲用者的安全和健康。對牛乳體細(xì)胞數(shù)進(jìn)行檢測,可以及時發(fā)現(xiàn)有炎癥的奶牛,進(jìn)而從源頭上保障牛乳的品質(zhì)。介紹了關(guān)于牛乳體細(xì)胞數(shù)的主要檢測方法,并對這些方法的特點進(jìn)行了分類匯總,進(jìn)而對這些方法的發(fā)展和應(yīng)用進(jìn)行了總結(jié)和展望。牛奶體細(xì)胞數(shù)有哪些檢測方法?下面具體來介紹一下:

 

1、牛奶體細(xì)胞的來源及正常指標(biāo)

奶牛乳腺正常時,分泌鮮乳內(nèi)的體細(xì)胞主要為巨噬細(xì)胞,但當(dāng)乳腺發(fā)生炎癥時,分泌鮮乳內(nèi)的體細(xì)胞主要為白細(xì)胞,是一種免疫細(xì)胞,是由于機(jī)體與病原相互斗爭產(chǎn)生的物質(zhì)。當(dāng)奶牛乳腺組織發(fā)生感染后,90%以上都為嗜中性粒細(xì)胞。在細(xì)菌侵入到乳腺組織并開始大量繁殖時,就會導(dǎo)致多核白細(xì)胞等免疫細(xì)胞逐漸接近感染部位,并侵入乳腺泡將病原微生物吞噬。另外,發(fā)生炎癥反應(yīng)時,巨噬細(xì)胞會大量增殖,并產(chǎn)生一些化學(xué)介質(zhì),促使炎癥反應(yīng)進(jìn)一步加重,造成組織毛細(xì)血管的通透性明顯增強,促使血漿白蛋白、免疫球蛋白以及其他多種白細(xì)胞侵入乳腺泡腔內(nèi),形成白細(xì)胞用于吞噬細(xì)菌。

牛奶體細(xì)胞數(shù)(SCC)主要用于判斷奶牛乳腺健康與否。例如,當(dāng)牛乳中SCC有所增加,但乳房組織沒有出現(xiàn)明顯癥狀,即可判斷患有亞臨床型乳房炎。另外,牛乳中的SCC還能夠用來表明發(fā)生炎癥反應(yīng)的輕重程度。通常來說,奶牛沒有發(fā)生乳房炎分娩的乳汁中,每毫升的牛乳SCC在20萬個以下,而如果發(fā)生臨床型乳房炎或者亞臨床型乳房炎時,每毫升牛乳SCC可超過50萬個。

2、常用檢測方法

1)顯微鏡細(xì)胞計數(shù)法。人工顯微鏡計數(shù)法是一種直接檢測法,是指鮮牛乳樣品直接滴加在載玻片上使用顯微鏡觀察,并由人工計算所含的體細(xì)胞。鮮牛乳采取該法檢測體細(xì)胞的步驟是:先配置染色液,即取40 mL四氯乙烷和54 mL乙醇,充分搖晃均勻,然后放在65℃的溫水溶液中進(jìn)行3 min加熱,再添加0.6 g甲基蘭,混合均勻后置于4℃冰箱,在溫度達(dá)到4℃時再添加6 mL冰醋酸,放在常溫條件下保存;取一片干凈的載玻片,劃分成4個小方格,每格面積為1 cm2,然后用微量注射器吸取10 μL生鮮牛乳樣品注射到1 cm2的載玻片上,平放在恒溫箱中,干燥后浸在染色液,后形成均勻玻片;放在300~500倍顯微鏡下對玻片上的染色細(xì)胞進(jìn)行觀察,按照一定的準(zhǔn)則計算體細(xì)胞數(shù)量。一般按照“數(shù)上不數(shù)下,數(shù)左不數(shù)右”的計數(shù)規(guī)則進(jìn)行計數(shù),防止出現(xiàn)遺漏和重復(fù)。盡管該法使用設(shè)備簡單,容易在實驗室外操作,但整個操作過于繁瑣,具有較大的工作量,特別是在計數(shù)時容易出錯。在人工顯微鏡計數(shù)法的基礎(chǔ)上,通過改進(jìn)發(fā)明熒光顯微鏡計數(shù)法,即使用特殊的緩沖液或染液對鮮牛乳樣品進(jìn)行處理,再使用安裝相應(yīng)濾色鏡的熒光顯微鏡進(jìn)行計數(shù)。一般來說,鮮牛乳中的蛋白質(zhì)不會形成熒光,不會影響測定,脂肪球會形成黃綠色的熒光,使用相應(yīng)的濾色鏡能夠擋住,只有體細(xì)胞形成的紅色熒光能夠看見,從而能夠更好地使熒光細(xì)胞同周圍背景進(jìn)行區(qū)別,能夠有效提高計數(shù)的準(zhǔn)確率。

2)加利福尼亞細(xì)胞數(shù)測定法(CMT法),是一種間接檢測法,其原理是鮮牛乳中的體細(xì)胞接觸表面活性試劑,如溴甲酚紅紫、烷基芒硫酸鹽、烷基芳基磺酸或者氫氧化鈉等,能夠使細(xì)胞收縮凝固,同時釋放脫氧核糖核酸,并發(fā)生凝聚,含有越多的體細(xì)胞,凝聚狀態(tài)則會越強,形成越多的凝聚塊,對這些凝聚塊統(tǒng)計就能夠估算體細(xì)胞的數(shù)量。該法所需設(shè)備少,操作簡單,檢測速度快,靈敏度高,價格便宜,結(jié)果比較準(zhǔn)確,且同直接鏡檢細(xì)胞計數(shù)法、過氧化氫酶活性等也具有較好的關(guān)聯(lián)性,且受環(huán)境溫度影響較小,樣品中即使混雜有毛發(fā)等外源物質(zhì)也不會對結(jié)果產(chǎn)生影響,適合對個體奶牛或者總奶樣進(jìn)行檢驗;缺點是只能夠得到體細(xì)胞的相對數(shù)量,比較容易受到人為因素影響,必須經(jīng)過專門培訓(xùn)的人員才能夠進(jìn)行該項檢查。另外,該法有時會出現(xiàn)假陽性結(jié)果,如鮮牛乳不新鮮或者泌乳末期的乳汁等,建議是檢測泌乳量中期的牛乳。牛乳感染細(xì)菌后能夠產(chǎn)生的毒素,導(dǎo)致體細(xì)胞被破壞,會使臨床乳腺炎陽性的牛乳呈陰性。

3)pH值檢測法。該法是一種間接檢測法,由于奶牛乳房發(fā)炎后所分泌的乳汁pH值同體細(xì)胞間存在一定的關(guān)聯(lián)性,從而可經(jīng)由測定牛乳樣品的pH值來判斷所含體細(xì)胞的數(shù)量。檢測時,先用一次性培養(yǎng)皿取2 mL左右的鮮牛乳樣品,并滴加相同劑量的診斷液,按照同心圓方式對培養(yǎng)皿進(jìn)行搖動,在30~60 s之間就能夠判斷結(jié)果。當(dāng)測地的牛乳pH值處于6. 4~6.6之間,判斷每毫升的牛乳中含有0~20萬個體細(xì)胞;pH值處于6.6~6.8之間,判斷每毫升含有20萬~50萬個體細(xì)胞;pH值位于6.8~7.0之間,判斷每毫升含有50萬~150萬個體細(xì)胞;pH值位于7.O~7.2之間,判斷每毫升含有150萬~500萬個體細(xì)胞;pH值超過7.2,判斷每毫升含有500萬個以上的體細(xì)胞。該法操作簡單,但是檢測結(jié)果有時不太準(zhǔn)確,還需要配合進(jìn)行顯微鏡檢測才能獲得比較準(zhǔn)確的結(jié)論。

 

檢測牛奶體細(xì)胞數(shù)有哪些方法?
前獲得世界各國普遍承認(rèn)和使用的體細(xì)胞計數(shù)方法概括起來主要分為顯微鏡人工計數(shù)法和自動計數(shù)儀計數(shù)法。
1、顯微人工計數(shù):體細(xì)胞計數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)方法為顯微鏡鏡檢法,此法準(zhǔn)確,大部分的快速檢測方法均用此法作校準(zhǔn),但在制備樣品、計數(shù)鏡檢時費時、費力,不適合作為現(xiàn)場快速和大樣品量時使用。


2、自動計數(shù)儀計數(shù):目前,在乳品生產(chǎn)中牛乳體細(xì)胞計數(shù)主要是依靠大型的體細(xì)胞儀完成的,體細(xì)胞自動計數(shù)分析研究主要有以下兩個方面:
(1)流式細(xì)胞分析法.具代表性的產(chǎn)品為美國BentlySomaCount計數(shù)儀。基于激光流式血細(xì)胞計數(shù)的方法來測定原奶中的體細(xì)胞數(shù)量,該法檢測速度快,適合乳品集中檢測,操作簡便計數(shù)準(zhǔn)確,耗材成本低。
(2)另一方面是利用數(shù)字圖像分析系統(tǒng),該方法是基于標(biāo)準(zhǔn)鏡檢法的一種方法,華誠睿光的牛博士Ⅱ和牛博士Ⅲ就是這種檢測方法的典型代表。機(jī)器設(shè)備成本低但是耗材成本高。

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